红外光谱法1.物质吸收红外光的必要条件 ①分子的振动必须能与红外辐射产生耦合作用，即分子振动时必须伴随瞬时偶极矩的变化②只有当照射分子的红外辐射光子的能量与分子振动能级跃迁所需的能量相等，才能实现振动与辐射的耦合，从而使分子吸收红外辐射能量产生振动能级的跃迁。

即 △Ev＝Ev2－Ev1＝hυ2.红外光谱法的缺点：①色散型仪器的分辨率低，灵敏度低，不适于弱辐射的研究② 不能用于水溶液及含水物质的分析③对某些物质不适用：如振动时无偶极矩变化的物质；左右旋光物质的IR谱相同；长链正烷烃类的IR谱近似等。

复杂化合物的光谱极复杂，难以作出准确的结构判断，往往需与其它方法配合3. 红外光谱的吸收峰：①泛频峰：倍频、合（组）频峰②倍频峰：由基态（v=0）跃迁到v=2，3，4，…激发态产生的③合频峰：在两个以上基频峰波数之和或差处出现的吸收峰。

4. 简正振动：把多原子分子的振动分解成许多简单的基本振动 简正振动的特点：① 振动的运动状态可以用空间自由度（空间三维坐标）来表示，体系中的每一质点（原子）都具有三个空间自由度② 分子的质心在振动过程中保持不变，分子的整体不转动。

③ 每个原子都在其平衡位置上作简谐振动，其振动频率及位相都相同，即每个原子都在同一瞬间通过其平衡位置，又在同一时间到达最大的振动位移④ 分子中任何一个复杂振动都可以看成这些简正振动的线性组合5. 影响吸收峰强度的因素① 振动能级的跃迁几率和振动过程中偶极距的变化是影响红外吸收峰强度的两个主要因素，基频吸收带一般较强，而倍频吸收带较弱。

② 基频振动过程中偶极矩的变化越大，其对应的峰强度也越大；振动的对称性越高（即化学键两端连接的原子的电负性相差越小），振动中分子偶极矩变化越小，谱带强度也就越弱因而，一般来说极性较强的基团振动吸收强度较大，极性较弱的基团振动吸收较弱。

③ 一般来说，反对称伸缩振动的强度大于对称伸缩振动的强度，伸缩振动的强度大于变形振动的强度6. 傅里叶变换红外分光光度计的特点（1）多路优点 导致其扫描速度较色散型快数百倍，有利于光谱快速记录，使FI-IR特别适用于与GC、HPLC联用，也可用来观测瞬时反应。

（2）辐射通量大 导致高灵敏度，检出限达10-9~10-12g；特别适用于测量弱信号光谱，且对研究催化剂表面的化学吸附物具有很大的潜力（3）波数准确度高 波数精度可达0.01cm-1（4）杂散光低 在整个光谱范围内杂散光低于0.3%。

（5）可研究很宽的光谱范围 1000~10cm-1，这对测定无机化合物和金属有机化合物十分有利（6）具有高的分辨能力 一般达0.1cm-1，甚至可达0.05cm-1，可以研究因振动和转动吸收带重叠而导致的气体混合物的复杂光谱。

（7）FT-IR适用于微少试样研究光学分析导论狭缝宽度的选择原则①定性分析：选择较窄的狭缝宽度—提高分辨率，减少其它谱线的干扰，提高选择性；②定量分析：选择较宽的狭缝宽度—增加照亮狭缝的亮度，提高分析的灵敏度；③应根据样品性质和分析要求确定狭缝宽度。

并通过条件优化确定最佳狭缝宽度④与发射光谱分析相比，原子吸收光谱因谱线数少，可采用较宽的狭缝但当背景大时，可适当减小缝宽NMR1. 影响化学位移的因素 化学位移是由于河外电子云产生的对抗磁场引起的，因此，凡是使核外电子云密度改变的因素，都能影响化学位移。

① 氢谱中影响化学位移的因素主要有：Ⅰ诱导效应 若核与电负性较强的原子或基团相连，则核周围的电子云密度下降（去屏蔽），屏蔽效应降低，化学位移值增大，吸收峰左移；若核与给电子基团连接，则其周围电子云密度增加，屏蔽效应增加，化学位移值减少，吸收峰右移。

Ⅱ共轭效应 p-π共轭使核周围电子云密度增加，化学位移值降低，共振吸收峰移向高场；π-π共轭使核周围电子云密度降低，化学位移值增加，共振吸收峰移向低场Ⅲ 磁各向异象效应 在外磁场的作用下，核外的环电子流产生了次级感生磁场，由于磁力线的闭合性质，感生磁场在不同部位对外磁场的屏蔽作用不同，在一些区域中感生磁场与外磁场方向相反，起抗外磁场的屏蔽作用，这些区域为屏蔽区，处于此区的共振吸收峰出现在高场（或低频）；而另一些区域中感生磁场与外磁场的方向相同，起去屏蔽的作用，这些区域为去屏蔽区。

处于此区的共振吸收峰出现在低场（高频），这种作用称为磁的各向异性效应磁的各向异性效应主要发生在具有多重键或共轭多重键的基团，他是通过空间感应磁场起作用的，涉及的范围大，所以又成为远程屏蔽 Ⅳ 范德华效应 因为范德华力作用，电子云相互排斥，导致原子核周围电子云密度降低，屏蔽减小，谱线向低场移动，这种效应称为范德华效应。

Ⅴ 氢键 分子形成氢键以后，因静电场的作用，使氢外围电子云密度降低而去屏蔽，d值增加Ⅵ 溶剂效应 溶质分子收到不同溶剂影响而引起的化学位移变化成为溶剂效应② 碳谱中影响化学位移的因素主要有： Ⅰ 杂化轨道的影响 屏蔽常数s（sp3）>s（sp）s（sp2）； Ⅱ 诱导效应 同氢谱； Ⅲ 空间效应 相互靠近的原子之间存在着范德华力，使13C化学位移移向高场，另外相互靠近的原子之间存在排斥力。

影响了核的屏蔽常数，进而也影响了化学位移； Ⅳ 共轭效应 如苯环，若与给电子基团连接，从而增加了邻位和对位碳的电荷密度，屏蔽效应增加，移向高场，当与吸电子基团连接时，邻位和对位碳的电荷密度减少，屏蔽减少，移向低场； Ⅴ 电场效应 对a、b位碳原子影响较大； Ⅵ 重原子效应 因原子碘和溴取代而使得化学位移减小的现象称为重原子效应，这是因为这些重原子的核外电子较多，原子半径较大，使得他们的供电子效应大于诱导效应； Ⅶ 同位素效应 分子中的质子被其同位素氘取代后，由于平均电子激发能的增加，导致相连碳的化学位移值减小，成为同位素效应。

其他影响因素还有分子内氢键的形成和介质效应仪器分析绪论1) 精密度（Precision）：使用同一方法或步骤进行多次重复测量所得分析数据之间符合的程度2) 误差（Bias）：测量值的总体平均值x与“真值m”接近的程度。

3）灵敏度（Sensitivity）：反映了仪器或方法区别微小浓度或含量变化的能力，也就是说，当浓度或含量有微小变化时，仪器或方法均可以觉察出来4）检测限（Detection limit, DL）：在已知置信水平，可以检测到的待测物的最小质量或浓度。

【检出限：以特定的分析方法，以适当的置信水平被检出的最低浓度或最小量（原子吸收）】5）信噪比（singnal-to-noise ratio, S/N）6）动态范围（Dynamic range）7）选择性 (Selectivity)：样品基体中其它组份对测定待测物时的干扰程度。

仪器分析校正方法1) 标准曲线法 标准曲线法的准确性与否与两个因素有关：标准物浓度配制的准确性；标准基体与样品基体的一致性2) 标准加入法 优点：基体(matrix)相近，或者说基体干扰相同；缺点：麻烦，适于小数量的样品分析。

3) 内标法 同位素稀释质谱法 (Isotope Dilution)：内标物是和分析物相同的化学物质，但在结构中至少有一个原子被其另一个同位素所取代原子发射光谱法原子发射光谱法用的检测方法有：目视法、摄谱法和光电法。

1. 目视法 用眼睛来观测谱线强度的方法称为目视法（看谱法）它仅适用于可见光波段常用仪器为看谱镜看谱镜是一种小型的光谱仪，专门用于钢铁及有色金属的半定量分析2.摄谱法 摄谱法是用感光板记录光谱将光谱感光板置于摄谱仪焦面上，接受被分析试样的光谱作用而感光，再经过显影、定影等过程后，制得光谱底片，其上有许多黑度不同的光谱线。

然后用影谱仪观察谱线位置及大致强度，进行光谱定性及半定量分析用测微光度计测量谱线的黑度，进行光谱定量分析3. 光电法: 光电法用光电倍增管检测谱线强度原子吸收与原子荧光光谱分析法1. 原子吸收光谱法定义：基于被测元素基态原子在蒸气状态对其原子共振辐射的吸收进行元素定量分析的方法。

原子吸收光谱位于光谱的紫外区和可见区原子吸收线轮廓以原子吸收谱线的中心频率（或中心波长）和半宽度表征；Ⅰ 中心频率由原子能级决定；Ⅱ 半宽度是中心频率位置，吸收系数极大值一半处，谱线轮廓上两点之间频率或波长的距离。

2. 谱线宽度 ①. 自然宽度 自然变宽的半宽度ΔνN=1/(2πτi) ②. 多普勒变宽 由辐射原子无规则的热运动引起又称热变宽 ③. 压力变宽（碰撞变宽） ④. 自吸变宽 ⑤. 场致变宽3. 石墨炉原子分析法。

① 接触良好② 惰性气体保护 通常使用的惰性气体主要是氩气③ 水冷保护4. （一）背景干扰①.分子吸收：指在原子化过程中生成的分子对辐射的吸收带状光谱，会在一定的波长范围内形成干扰②.光散射：指原子化过程中产生的微小的固体颗粒使光发生散射，造成透过光减小，吸收值增加。

（二）背景校正方法Ⅰ邻近非共振线校正法：背景吸收是宽带吸收本法适用于分析线附近背景吸收变化不大的情况，否则准确度较差Ⅱ 连续光源背景校正法：原子吸收分光光度计上配有连续光源自动扣除背景紫外区：氘灯：可见区：碘钨灯、氙灯。

Ⅲ Zeeman效应背景校正法：Zeeman效应 是指在磁场作用下简并的谱线发生分裂的现象 在正常Zeeman效应中，每条谱线分裂为三条分线;在反常Zeeman效应中，每条谱线分裂为三条分线或更多条分线，这是由谱线本身的性质所决定的。

是原子谱线分裂的普遍现象5. 原子化条件（1）火焰原子化法（2）石墨炉原子化法 干燥：105 ~ 125℃灰化：能除去试样中基体与其它组分而被测元素不损失的情况下，尽可能高的温度原子化温度：可得到原子吸收最大吸光度值的最低温度。

净化（清除阶段）：温度应高于原子化温度，时间仅为3 ~ 5s，以便消除试样的残留物产生的记忆效应6. 原子荧光光谱法①共振荧光 气态自由原子吸收共振线被激发后，再发射出与原激发辐射波长相同的辐射②非共振荧光 当荧光与激发光的波长不相同时，产生非共振荧光。

（1）直跃线荧光 激发态原子跃迁回至高于基态的亚稳态时所发射的荧光（Stokes荧光）（2）阶跃线荧光 其荧光波长大于激发线波长（3）anti-Stokes荧光 其荧光能大于激发能，荧光波长小于激发线波长。

③敏化荧光 受光激发的原子与另一种原子碰撞时，把激发能传递给另一个原子使其激发，后者在以辐射形式去激发而发射荧光荧光猝灭:受激原子和其他粒子碰撞，把一部分能量变成热运动与其他形式的能量，因而发生无辐射的去激发过程。

荧光猝灭会使荧光的量子效率降低，荧光强度减弱可用氩气来稀释火焰，减小猝灭现象质谱法质谱分析是将样品转化为运动的带电气态离子，于磁场中按质荷比(m/z)大小分离并记录的分析方法1、进样 2、离子化 3、离子也可因撞击强烈而形成碎片离子。

4、荷电离子被加速电压加速，产生一定的速度v，与质量、电荷及加速电压有关5、加速离子进入一个强度为H的磁场，发生偏转气相源：先蒸发再激发，适于沸点低于500oC、对热稳定的样品的离子化，包括电子轰击源、化学电离源、场电离源、火花源；

解吸源：固态或液态样品不需要挥发而直接被转化为气相，适用于分子量高达105的非挥发性或热不稳定性样品的离子化包括场解吸源、快原子轰击源、激光解吸源、离子喷雾源和热喷雾离子源等硬源：离子化能量高，伴有化学键的断裂，谱图复杂，可得到分子官能团的信息；。

软源：离子化能量低，产生的碎片少，谱图简单，可得到分子量信息紫外可见分光光度法1.朗伯比耳定律的局限性（1）比耳定律本身的局限性:Ⅰ所有的吸光质点之间不发生相互作用.Ⅱ比耳定律只适用于稀溶液（<0.01 mol/L）.（2）化学偏离:主要是指分析物质涉及到任何平衡反应时，如分析物质与溶剂发生缔合、离解及溶剂化反应，产生的生成物与被分析物质具有不同的吸收光谱，出现化学偏离。

（3）非均相体系偏离:溶液必须是均相体系胶体、乳胶、悬浮物、沉淀等非均相体系产生的光散射（4）仪器偏离:生色团：广义地说，分子中可以吸收光子而产生电子跃迁的原子基团；严格地说，不饱和吸收中心助色团：带有非键电子对的基团（如-OH、-OR、-NHR、-SH、-Cl、-Br、-I等），它们本身不能吸收大于200 nm的光，但是当它们与生色团相连时，会使其吸收带的最大吸收波长λmax发生移动，并增加其吸收强度。

红移和紫移：在有机化合物中，常常因取代基的变更或溶剂的改变，使其吸收带的最大吸收波长λmax发生移动向长波方向移动称为红移；向短波方向移动称为紫移增色效应和减色效应：由于化合物的结构发生某些变化或外界因素的影响。

使化合物的吸收强度增大的现象，叫增色效应；使吸收强度减小的现象，叫做减色效应2.有机化合物的紫外可见光谱 A. 饱和烃及其取代衍生物 饱和烃分子中只含σ键，只有σ→σ*跃迁 饱和烃的取代衍生物的杂原子上存在n电子，可以产生n→σ*和σ→σ*跃迁。

B. 不饱和烃及共轭烯烃 不饱和烃类分子中含有σ和π键，可以产生σ→σ*和π→π*跃迁 C. 羰基化合物 羰基化合物含有>C=O基团，可以产生n→σ*， n→π*和π→π*三个吸收带3.溶剂对电子光谱的影响 π→π*跃迁谱带红移；n→π*跃迁谱带紫移 在选择测定电子吸收光谱曲线的溶剂时，注意：①尽量选用低极性溶剂；②能很好地溶解被测物，并且形成的溶液具有良好的化学和光化学稳定性；③溶剂在样品的吸收光谱区无明显吸收。

4. 光电倍增管优点：高灵敏度；响应快；适于弱光测定，甚至对单一光子均可响应缺点：热发射强，因此暗电流大，需冷却（-30oC)不得置于强光(如日光)下，否则会永久损坏 PMT硅二极管 特点：灵敏度介于真空管和倍增管之间。

5.分光光度计的类型 ①单光束分光光度计优点：仪器简便、操作简单、成本低 缺点：要求光源和检测器有很高的稳定性，定量分析结果误差较大 ②双光束分光光度计 ③双波长分光光度计 特点：可以测定高浓度试样，多组分混合试样以及浑浊试样。

④多道分光光度计6.分析条件的选择 A．仪器测量条件 合适的吸光度范围（调节待测物浓度、选用适当厚度的吸收池等）入射光波长和狭缝宽度 B．反应条件的选择 显色剂用量；溶液酸度的选择；显色反应时间、温度等 C．参比溶液的选择 溶剂参比；试剂参比；试样参比；平行操作溶液参比 D．干扰及消除方法 控制酸度；掩蔽剂；选择适当分析波长；分离。

电位分析法定义：利用电极电位与浓度的关系测定物质含量的电化学分析法电位分析法分为直接电位法和电位滴定法电位分析法最显著特点是：仪器设备简单，操作简便，价格低廉现已广泛普及应用方法分类：1 经典方法：按原理命名，划分为五大类：（1）电导分析（G=1/R），（2）电位分析（E=k+SlogC），（3）库分析（Q=nFM），（4） 电解分析（就指电重量方法），（5）伏安和极谱法（i=kc）。

2 按激发信号分类：（1）电位激发（计时电流，伏安和极谱，库仑），（2）电流激发（计时电位，恒流电解，库仑等），（3）滴定剂激发（滴定方法等）3 按电极反应本质分类（IUPAC 推荐方法）（1）既无双电层，也无电极反应。

电导法，电导滴定法等（2）有双电层无电极反应微分电容，非法拉第法等（3）有电极反应A．电解电流=0 B．电解电流≠0极化电极与去极化电极 电化学分析法中还把电极区分为极化电极和去极化电极,插入试液中的电极的电极电位完全随外加电压改变或电极电位改变很大而产生的电流变化很小，这种电极称为

极化电极；反之，电极电位不随外加电压改变，或电极电位改变很小而电流变化很大这种电极称为去极化电极析出电位是指在工作电极上产生迅速的、连续不断的电极反应时，还原析出所需最正的电极电位；氧化析出所需最负的电极电位。

分解电压是指在工作电极上产生迅速的连续不断的电极反应时所需要的最小外加电压E为正时，为自发电池，为负时，是电解池自发电池： 阴极—还原反应（右+）阳极—氧化反应（左-）电解池： 阴极—还原反应（右-）阳极—氧化反应（左+）。

参比电极：（1）可逆性：有电流流过（μA）时，反转变号时，电位基本上保持不变（2）重现性：溶液的浓度和温度改变时，按Nernst 响应，无滞后现象（3）稳定性：测量中电位保持恒定、并具有长的使用寿命电位滴定法

：电位滴定的基本原理与普通容量分析相同，其区别在于确定终点的方法不同它是以测量滴定过程中指示电极的电极电位 （或电池电动势）的变化为基础的一类滴定分析方法滴定过程中，随着滴定剂的加入，发生化学反应，待测离子或与之有关的离子活度（浓度）发生变化，指示电极的电极电 位（或电池电动势）也随着发生变化，在化学计量点附近，电位（或电动势）发生突 跃，由此确定滴定的终点。

电位滴定的类型及终点指示电极的选择：①酸碱滴定：可以进行某些极弱酸（碱）的滴定指示剂法滴定弱酸碱时，准确滴定的要求必需 ≥10-8，而电位法只需≥10-10；电位法所用的指示电极为pH电极②氧化还原滴定：指示剂法准确滴定的要求是滴定反应中，氧化剂和还原剂的标准电位之差必需△φo ≥0.36V（n＝1），而电位法只需≥0.2V，应用范围广；电位法采用的指示电极一般采用零类电极（常用Pt电极）。

③络合滴定：指示剂法准确滴定的要求是，滴定反应生成络合物的稳定常数必需是 ≥6，而电位法可用于稳定常数更小的络合物；电位法所用的指示电极一般有两种，一种是Pt电极或某种离子选择电极，另一种却是Hg电极（实际上就是第三类电极）。

④沉淀滴定：电位法应用比指示剂法广泛，尤其是某些在指示剂滴定法中难找到指示剂或难以选择滴定的体系，电位法往往可以进行；电位法所用的指示电极主要是离子选择电极，也可用银电极或汞电极化学电池是化学能与电能互相转换的装置．能自发地将化学能转变成电能的装置称为

原电池；而需要从外部电源提供电能迫使电流通过，使电池内部发生电极反应的装置称为电解电池为什么脉冲极谱灵敏度高？答：电解池总电流包括电解电流if、毛细管噪声电流iN和充电电流ic它们分别按t-1/2、 t-n和e-t/RC衰减，其中毛细管噪声介于电解电流和和充电电流之间。

由于脉冲极谱中的脉冲持续时间为40-80ms，比方波极谱的要长在脉冲后期测量电流时，此时的毛细管噪声电流iN和充电电流ic几乎都衰减至0，测得的主要是电解电流，从而提高了脉冲极谱的灵敏度电解分析(electrolytic analysis)包括两种方法：一是利用外电源将被测溶液进行电解，使欲测物质能在电极上析出，然后称析出物的重量，算出该物质在样品中的含量，这种方法称为电重量分析法（electrolytic gavimetry）；二是使电解的物质由此得以分离，而称为电分离分析法(electrolytic separation)。

库仑分析法（coulometry）是在电解分析法的基础上发展起来的一种分析方法它不是通过称量电解析出物的重量，而是通过测量被测物质在100％电流效率下电解所消耗的电量来进行定量分析的方法,定量依据是法拉第定律。

电重量分析法比较适合高含量物质测定，而库仑分析法即是用于痕量物质的分析，仍然具有很高的准确度库仑分析法，与大多数其它仪器分析方法不同，在定量分析时不需要基准物质和标准溶液，是电量对化学量的绝对分析方法Faraday电解定律

W = MQ/Nf（W为物质在电极上析出的以克为单位的量；M为分子量,n为电子转移数,F为Faraday常数，1F=96485C；Q为电量，以C为单位）库仑滴定法：由恒电流发生器产生的恒电流通过电解池，被测物质直接在电极上反应或在电极附近由于电极反应产生一种能与被测物质起作用的试剂,当被测物质作用完毕后，由指示终点的仪器发出信号，立即关掉计时器。

由电解进行的时间t（S）和电流强度（A），可求算出被测物质的量W（g）滴定终点的确定方法：（1）化学指示剂法 这是指示终点的最简单的方法此法可省去库仑滴定装置中的指示系统，比较简单最常用的经典方法是淀粉作指示剂，电生碘滴定亚砷酸根的测定方法。

指示剂方法，灵敏度较低，对于常量的库仑滴定能得到满意的测定结果选择指示剂应注意：①所选的指示剂不能在电极上同时发生反应；②指示剂与电生滴定剂的反应，必须在被测物质与电生滴定剂的反应之后，即前者反应速度要比后者慢。

（2）电流法 这种方法的基本原理为被测物质或滴定剂在指示电极上进行反应所产生的电流与电活性物质的浓度成比例，终点可从指示电流的变化来确定电流法可分为单指示电极电流法和双指示电极电流法前者常称为极谱滴定法、后者又称为永停终点法。

色谱分析调整保留时间t’R = tR - tM 调整保留体积V’R = VR - VM相对保留值g2,1 = t’R2/t’R1 分离因子a = t’R2/t’R1 保留因子k = ns / nm峰面积的测量方法 峰高乘半峰宽法 A = 1.065 h Y1/2 峰高乘平均峰宽法 A = h (Y0.15+Y0.85)/2。

氢火焰离子化检测器是利用氢火焰作为电离源，使有机物电离，产生微电流而响应的质量型检测器，简称氢焰检测器最常用的检测器之一特点：1.几乎所有的有机物均有响应2.对烃类灵敏度高且与碳原子数成正比 (10-12 g/s)3.线性范围宽、结构较简单、操作方便4.死体积几乎为零，可直接与毛细管柱相联5.需要三种气源及流速控制系统。

破坏性（对样品）电子俘获检测器(ECD)是以63Ni或氚作放射源的浓度型离子化检测器特点：1.灵敏度高：气相色谱检测器中灵敏度最高的一种(10-14 g/mL) 2.选择性高：只对具有电负性的化合物有响应（含卤素、硫、磷、氮、氧的物质） 3.应用广泛：仅次于 TCD 和 FID 4.线性范围较小：102--104。

火焰光度检测器（FPD)又称硫磷检测器它是利用富氢火焰使含硫、磷杂原子的有机物分解、发光建立起来的检测器特点：1.对含硫、磷的化合物有高灵敏度和高选择性2.对硫为非线性响应3.也可用于有机金属化合物和其它杂原子化合物。

热离子化检测器 (氮磷检测器)是一种电离型检测器 (质量型）特点：对氮磷化合物灵敏度高，选择性好专用于痕量氮磷化合物的检测气相色谱与质谱联用（GC-MS) 质谱法是灵敏度高、定性能力强的分析方法；色谱法是分离效率高、定量分析方便的分析方法。

两者联用的优势：GC是MS的理想“进样器”（试样经色谱分离后，以纯物质进入质谱）；MS是GC的理想“检测器”（不仅灵敏度高，而且可提供定性结果）固定液的要求：①挥发性小，在操作温度下有较低蒸气压，以免流失。

②热稳定好，在操作温度下呈液态但不发生分解③对试样个组分有适当的溶解能力④具有高的选择性⑤化学稳定性好，不与被测物质起化学反应“相似相溶”原则选择固定液：分离非极性物质：一般选用非极性固定液分离极性物质：选用极性固定液。

分离非极性和极性混合物：一般选用极性固定液分离能形成氢键的试样：一般选用极性或氢键型固定液复杂的难分离物质：可选择两种或两种以上的混合固定液未知样品：用几种常用固定液试验选择柱温的一般原则：①在使最难分离的组分有尽可能好的分离，且保留时间适宜，峰形对称的前提下，采取适当低的柱温。

②柱温不能高于固定液的最高使用温度③柱温要高于固定液的熔点气相色谱流动相：对组分没有亲和力的惰性气体，对分离选择性几乎无影响高效液相色谱流动相：可选用不同极性的液体选择余地大；对分离影响大（与组分或固定相均作用）。

方法的局限性：成本高、环境污染、梯度洗脱操作复杂缺少灵敏度高的通用型检测器复杂样品分离，缺少总理论塔板数达数十万的色谱柱压易分解或变性的生物样品光电二极管阵列检测器：可获得三维色谱-光谱图的检测器；三维色谱-光谱图：时间-波长-吸收值；波长范围：190 - 950nm；可同时获得不同波长条件下的色谱图；可利用色谱保留值及光谱特征吸收曲线定性；可判别色谱峰的纯度及分离状态。

荧光检测器：利用某些试样具有荧光特性建立的检测方法；高灵敏度和高选择性（检出限 10-12 - 10-13 g/cm3)；稠环芳烃、甾族化合物、酶、氨基酸、维生素、色素、蛋白质等荧光物质示差折光检测器：连续测定流出液折光指数的变化；通用型检测器，但灵敏度较低（10-7 g/cm3)：反射式、偏转式、干涉式。

使用要点：流动相组成要恒定（变化值<10-6）；温度恒定 （样品池与参比池的温差 ±10-4 C)；压力恒定 （检测池不耐压）；流速稳定 （流量波动<5%）；不可用于梯度洗脱蒸发光散射检测器：通用型检测器。

不需要衍生便可检测任何不带发色基团的化合物，比示差折光检测器更佳的灵敏度及稳定性对温度变化不敏感，可用于梯度洗脱，响应值与样品质量有关，对所有样品的检测给出近乎一样的响应因子测定物质的纯度和定量测定未知物。

电导检测器：基于物质在某些介质中电离后所产生电导变化进行测定的检测器主要应用于离子色谱受温度影响较大保留机理：溶质分子和溶剂分子与吸附剂表面活性点的竞争流动相对样品的溶解能力溶质分子的各种官能团与吸附剂表面活性点的分子间相互作用。

键合固定相的基质材料主要为硅胶:（1）疏水基团:同链长的烷烃（C8, C18） 和苯基等.（2）极性基团:丙基、腈乙基、醇和醚等.（3）其它基团:离子交换基、手性识别基、配基（如酶、抗原、激素等）离子排斥色谱的原理

: 强阳离子交换树脂与有机酸的作用由于Donnan电位的存在，使强酸阴离子受阻于树脂之外，而低电离度的弱酸分子可进入树脂内部，通过与树脂相互作用得到保留选择性：①组分受阻程度的不同②组分与树脂功能基的极性相互作用的差异。

③组分与树脂基体间的非极性相互作用的差异SEC的特点：保留体积小于死体积（分配系数10%）流动相：对样品有较好的溶解能力；能浸润凝胶、防止凝胶的吸附作用；要与检测器相匹配；粘度要低。

高聚物：四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺等生物大分子：缓冲溶液和一些添加剂缓冲溶液的pH：提高缓冲溶液的pH,使电渗流增加，缩短分析时间改变缓冲溶液的pH, 可改变某些组分的带电性质和数量，使淌度发生变化，提高选择性。

毛细管凝胶电泳分离原理：一些生物大分子如DNA和被SDS饱和的蛋白质分子，其电荷/质量之比与分子大小无关，电泳淌度几乎相同，用CZE模式很难分离在含有筛分介质的毛细管中，这些分子在电场作用下电泳，受到的阻力不同，迁移速度有差异。